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将两个或更多DNA片段按照设计组装在一起一直是生物学研究中非常基础且重要的一步.在启动子和外显子功能研究、蛋白质功能研究以及基因操作等传统领域中DNA连接技术都有广泛的应用.而在合成生物学这门新兴学科中,DNA连接更是成为许多研究必不可少的核心步骤.本文开发的一种新型DNA连接技术，该技术通过利用Taq DNA连接酶的耐热性和连接特性在复数次热循环中配合单链寡核苷酸helper实现目的片段的特异性连接和产物的指数增长。结果表明TLCR技术能够高效实现DNA片段的一次性定向连接;在连接片段数量、连接长度等方面有着优良的表现;在平末端片段连接和混杂体系特异性捕获上有独到之处;相较于传统方法有更高的自由度。