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目的 parkin是PD最常见的常染色体隐性遗传致病基因,其突变形式多样,包括点突变、小片段缺失或插入以及基因重排突变(如外显子缺失、双重或多重突变).基因重排是parkin一种常见的突变形式,50％的parkin基因改变为重排突变.多重连接探针扩增技术(multiple ligation-dependent probe amplification,MLPA)是一种简单、快速、高效、敏感的基因筛查技术,可用于检测外显子的剂量改变和特定基因的特定位点的改变.本研究拟构建parkin基因MLPA检测试剂盒,并应用该试剂盒对中国散发帕金森病(sporadic parkinson disease,SPD)患者进行parkin基因重排突变分析,完善帕金森病的基因诊断平台.方法 根据MLPA探针设计原则设计parkin外显子探针并构建MLPA试剂盒,与本研究小组前期应用实时荧光定量PCR技术检测的散发病例结果比较,验证试剂盒检测结果的准确性；运用设计的试剂盒对中国SPD患者parkin基因进行重排突变检测,并行实时荧光定量PCR进一步验证阳性结果.结果 经过验证确立了各探针的最佳浓度,检验了探针的稳定性及可靠性,成功建立了parkin基因MLPA试剂盒；与78例本研究小组前期运用荧光定量PCR检测的散发病例相比较,发现76例结果相同,2例结果不同,均为假阴性,且均是未检测出外显子杂合重复；应用设计的MLPA试剂盒对755例散发PD患者进行检测,阳性结果再行实时荧光定量PCR验证,发现25例患者携带parkin基因的重排突变,突变频率为3.3％.其中男性18例,女性7例,发病年龄波动在14～72岁之间；其中早发病例176例(发病年龄≤45岁),携带parkin重排突变患者20例,突变频率为11.4％；晚发病例(发病年龄＞45岁)579例,携带parkin重排突变患者5例,突变频率为0.86％.其中18例为单个外显子重排突变,其中,1例为单个外显子的杂合重复,2例单个外显子纯合缺失,7例为外显子的多重缺失突变,其中,1例为外显子2、3的多重杂合缺失,1例为外显子2、4的多重杂合缺失,1例为外显子2、3、4、5、6的多重杂合缺失,1例为外显子4、5、6、7的多重杂合缺失,1例为外显子3、4的多重纯合缺失,1例为外显子11、12的多重杂合缺失,1例为外显子1、2、3、4、5的多重杂合缺失.其中以多重杂合缺失为主要表现形式.结论 成功构建了parkin基因MLPA试剂盒,运用设计的MLPA试剂盒对SPD患者进行了parkin基因的重排突变检测,发现突变频率为3.3％.