【摘 要】
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目的 探讨一氧化氮在携带不同p53基因状态的人非小细胞肺癌细胞中对辐射诱导的细胞凋亡和DNA双链断裂的双向性影响.方法 选用p53缺如的人肺癌H1299细胞,通过稳定转染野生
【出 处】
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北京大学医学部近距离放疗研究中心成立大会暨北京大学第三届国际放射肿瘤学术论坛
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目的 探讨一氧化氮在携带不同p53基因状态的人非小细胞肺癌细胞中对辐射诱导的细胞凋亡和DNA双链断裂的双向性影响.方法 选用p53缺如的人肺癌H1299细胞,通过稳定转染野生型p53 (wtp53)或突变型p53 (rmp53)基因,得到wtp53或mp53细胞.X线照射前,细胞作用于不同浓度的硝酸异山梨酯(ISDN,一种一氧化氮供体).细胞内质粒载体的稳定表达由RT-PCR和限制性内切酶片段长度多态性分析(RFLP)法检测.凋亡和yH2AX分别由Hoechst33342染色法和流式细胞术测定.凋亡相关蛋白的表达由Western blot检测.结果 在H1299/wtp53和H1299/mp53细胞中,p53基因7号外显子RT-PCR的产物可以观察到清晰的110bp条带.7号外显子用MspI或BsrI限制性内切酶特异性消化后,分别在H1299/wtp5或H1299/mp53细胞中,可以观察到清晰的70 bp条带.在wtp53细胞中,X线辐射前作用于低浓度的ISDN(5μM),可观察到凋亡和DNA双链断裂的显著降低,而作用于高浓度的ISDN(500μM),却观察到凋亡和DNA双链断裂显著升高.此外,一氧化氮可双向性影响X线照射诱导的通过凋亡相关蛋白Caspase-3和Bax介导的凋亡.但是,在上述ISDN的任何浓度,所有这些现象并没有在H1299/mp53细胞中观察到.结论 在人肺癌细胞中,低和高浓度的一氧化氮可双向性影响X线照射诱导的通过Bax和Caspase-3介导的凋亡以及DNA双链断裂的变化,并且一氧化氮可通过p53基因表达调控来影响细胞的生存与死亡.
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