【摘 要】
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目的:表达肺炎支原体P116蛋白,通过对其免疫原性进行研究,为后期肺炎支原体检测试剂盒基因重组亚单位疫苗的研制提供实验依据.
方法:将重组好的P116蛋白表达质粒转入大肠
【机 构】
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华东生物医药研究所,南京210002;中国药科大学生命科学与技术学院,南京210009华东生物医药研究所,南京210002华东生物医药研究所,南京210002;南京医科大学基础医学院,南京210005
【出 处】
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中国生物工程学会第六次全国会员代表大会暨第九届学术年会
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目的:表达肺炎支原体P116蛋白,通过对其免疫原性进行研究,为后期肺炎支原体检测试剂盒基因重组亚单位疫苗的研制提供实验依据.
方法:将重组好的P116蛋白表达质粒转入大肠杆菌中进行扩大表达,表达菌体经离心、破碎处理,获得细胞上清,将细胞上清与GST胶进行结合,采用亲和层析的方法对获得的细胞上清进行纯化,用1×PBS洗脱杂蛋白,用还原性谷胱甘肽溶液洗脱目的蛋白,将纯化好的目的蛋白用1×PBS透析液进行透析,用BCA法对纯化蛋白的浓度进行测定.
结果：BCA测定结果显示纯化的蛋白纯度达90％以上,SDS检测证实该蛋白相对分子量约为116kD,分子量符合预期大小,能与小鼠抗P116血清发生阳性反应。ELISA检测重组P116的抗原性,OD值与其蛋白浓度间有良好的线性关系,表明其有较好的抗原性和特异性。
结论：对肺炎支原体P116蛋白免疫原性分析，为后期肺炎支原体检测试剂盒基因重组亚单位疫苗的研制提供了实验依据。
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