【摘 要】
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呼肠孤病毒科病毒的复制和子代病毒粒体的装配在由病毒非结构蛋白构成的病毒原质(viroplasm)上进行.植物呼肠孤病毒属病毒(phytoreoviruses)的代表种水稻矮缩病毒(rice d
【机 构】
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福建农林大学植物病毒研究所,福州 350002
【出 处】
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中国植物病理学会2014年学术年会
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呼肠孤病毒科病毒的复制和子代病毒粒体的装配在由病毒非结构蛋白构成的病毒原质(viroplasm)上进行.植物呼肠孤病毒属病毒(phytoreoviruses)的代表种水稻矮缩病毒(rice dwarf virus,RDV)的3个非结构蛋白Pns6、Pns1 1和Pns12是病毒侵染介体黑尾叶蝉培养细胞时形成viroplasm的基质成分,但该3个非结构蛋白的在病毒复制过程中的机理仍有待揭示.本研究将源于RDV Pns6、Pns11和Pns12基因的体外合成dsRNAs分别导入黑尾叶蝉培养细胞和虫体内,免疫荧光实验发现通过dsRNA干扰其中任何一个基因,都会导致RDV细胞侵染率和介体带毒率显著降低.RT-qPCR实验表明dsRNAs不仅降低了对应基因片段的转录水平,也降低了另外两个片段和病毒外壳蛋白P8基因的转录水平.Western blot也显示干扰其中一个蛋白,都可同时降低Pns6、Pns11和Pns12三个蛋白和病毒外壳蛋白P8的表达水平.RDV基因组检测表明该3个蛋白对应的RNA干扰显著降低了RNA合成水平,而另一个非结构蛋白Pns10的dsRNA对RNA合成没有明显影响.因此推断Pns6、Pns11和Pns12与病毒复制直接相关,皆为RDV的复制关键因子.本研究首次建立了适应黑尾叶蝉培养细胞和介体昆虫的高效RNA干扰技术体系,确定了RDV Pns6、Pns11和Pns12为病毒缺一不可的关键复制因子,为RDV viroplasm的功能和病毒的复制机理的研究奠定基础.
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