【摘 要】
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大肠杆菌中有完整的L-丝氨酸合成途径,可作为直接发酵L-丝氨酸的出发菌进行研究.大肠杆菌serA基因编码的磷酸甘油酸脱氢酶(PGDH),为L-丝氨酸合成的关键酶,该酶将3-磷酸甘油酸
【机 构】
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教育部工业微生物重点实验室,天津科技大学生物工程学院,天津300457
【出 处】
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2011年国际氨基酸产业创新与联盟发展高峰论坛
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大肠杆菌中有完整的L-丝氨酸合成途径,可作为直接发酵L-丝氨酸的出发菌进行研究.大肠杆菌serA基因编码的磷酸甘油酸脱氢酶(PGDH),为L-丝氨酸合成的关键酶,该酶将3-磷酸甘油酸转化为磷酸羟基丙酮酸,为L-丝氨酸合成第一步.为了通过基因工程手段来增加L-丝氨酸的产量,采用PCR方法扩增serA基因,利用高效的原核表达载体pET28a(+)对serA基因进行克隆表达,实现了磷酸甘油酸脱氢酶在大肠杆菌中的表达.聚丙烯酰胺电泳分析显示,重组菌株在50kD处有明显的蛋白表达带.经摇瓶发酵并对样品进行酶活测定以及高效液相色谱分析表明,PGDH酶总活性比对照菌提高约2.1倍,重组菌株L-丝氨酸积累量最高值较出发菌株提高了约30％.
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