【摘 要】
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微藻的基因工程改造可迅速提高微藻的种质性能和生产品质,是近年来研究工作的重点.斜生栅藻(Scenedesmusobliquus)具有光合效率高、生长迅速、环境适应能力强和分布广泛
【机 构】
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上海交通大学生命科学技术学院 上海200240
【出 处】
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中国生物工程学会第六次全国会员代表大会暨第九届学术年会
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微藻的基因工程改造可迅速提高微藻的种质性能和生产品质,是近年来研究工作的重点.斜生栅藻(Scenedesmusobliquus)具有光合效率高、生长迅速、环境适应能力强和分布广泛等优点,广泛应用于CO2减排、废水处理、生物饵料和生物能源生产等领域.目前斜生栅藻高效稳定的遗传转化体系还有待进一步开发.本文在实验室已有的研究结果基础上,探索建立了一种线性载体转化斜生栅藻的方法.选取S.obliquus FSP-3为实验藻种,pCAMBIA1302为实验载体,首先研究了0、100、150、200、250和300 μg/mL等6个潮霉素浓度的BG11固体培养基和液体培养基对该藻种生长的影响,结果表明BG11固体培养基中潮霉素浓度为150 μg/mL时完全抑制S.obliquus FSP-3的生长,BG11液体培养基中潮霉素浓度为150 μg/mL时完全抑制该藻种的生长,所以选取150 μg/mL为液体和固体培养基潮霉素筛选浓度.实验采用电转化方法,将pCAMBIA1302载体线性化转化S.obliquus FSP-3,研究了电转化过程中藻细胞密度(1×107 cells/mL、1×108 cells/mL和1×109 cells/mL)、脉冲电压(1.0 kV、1.5 kV 、2.0 kV 和2.5 kV)和电击次数(1次、2次和3次)等三个参数对S.obliquus FSP-3转化结果的影响.实验结果表明,藻细胞密度在1×108-1×109 cells/mL、脉冲电压为2.0 kV与电击次数为1次时,能够得到阳性转化子,并在荧光显微镜下观察到绿色荧光,阳性转化子能够在抗性固体和非抗性液体培养基交替培养中稳定传代12周.目前正在对微拟球藻、蛋白核小球藻等其他微藻的稳定遗传转化方法进行进一步深入研究,构建稳定遗传的微藻转基因藻种.
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