【摘 要】
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甘蔗黑穗病是最严重的甘蔗真菌性病害,甘蔗与黑穗病菌互作的差异表达基因的分离与鉴定是深入解析甘蔗品种抗黑穗病分子机制的基础.本研究以12个3锚锭引物和8个5随机引物构成引物组合,运用DDRT-PCR差异显示方法,分析了甘蔗品种NCo376和F134接种黑穗病菌前后的基因表达差异.经克隆、测序和半定量RT-PCR验证,共获得了7条真实差异表达片段,这些片段分别同GenBank中编码细胞色素C氧化酶基因
【机 构】
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农业部甘蔗遗传改良重点开放实验室 中国福州 350002
【出 处】
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中国作物学会甘蔗专业委员会第十三次学术讨论会
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甘蔗黑穗病是最严重的甘蔗真菌性病害,甘蔗与黑穗病菌互作的差异表达基因的分离与鉴定是深入解析甘蔗品种抗黑穗病分子机制的基础.本研究以12个3锚锭引物和8个5随机引物构成引物组合,运用DDRT-PCR差异显示方法,分析了甘蔗品种NCo376和F134接种黑穗病菌前后的基因表达差异.经克隆、测序和半定量RT-PCR验证,共获得了7条真实差异表达片段,这些片段分别同GenBank中编码细胞色素C氧化酶基因、核糖体蛋白基因、NAD-依赖型苹果酸脱氢酶基因、氨基转移酶基因、乙烯响应相关结合蛋白基因、RNA聚合酶特异转录起始因子和反转录转座子的序列的同源性达28％～99％.半定量RT-PCR分析结果表明,细胞色素C氧化酶基因的表达受甘蔗黑穗病菌和水杨酸的调控,具有不依赖于过氧化氢的作用机制以及在甘蔗根、茎、叶中表达的抗病基因组成型表达特点,但表达水平较低.推测甘蔗受黑穗病菌侵染后,抗病基因型可能通过细胞色素C氧化酶基因的诱导表达,促使植保素合成增多,以此抵抗或抑制外来病原菌的胁迫.研究结果丰富了甘蔗与黑穗病菌互作的分子机制研究,为甘蔗抗黑穗病分子育种奠定了基础.
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重组甘蔗AcC氧化酶基因在大肠杆菌中表达,其产物以不溶性包涵体存在。用Ni2+-NTA亲和层析柱对其进行纯化,结果显示,在层析柱上直接复性及纯化的方法比在变性条件下Ni2+-NTA纯化然后稀释透析进行复性的方法简捷、效果好,获得的目的蛋白质纯度大于98％,活性为132.58nmolC2H4/mg·h.
对6个甘蔗品种嫩叶鞘进行离体培养,研究不同基本培养基、不同蔗糖浓度、不同品种、不同取材季节和不同光照培养条件对外植体褐变的影响.试验结果表明。3种基本培养基中,以N6培养基的外植体褐化率最高(35.44％),其次为Miller培养基(27.15％)、White培养基(17.87％)；采用不同蔗糖浓度处理,以40g/L处理的外植体平均褐化率最高(40.24％),其次为30g/L(33.95％)、20
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