【摘 要】
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目的:人弹性蛋白生物相容性好、具有良好物理化学特性,是近年来生物材料研究领域的热点之一.研究通过建立类人弹性蛋白原核表达载体及诱导表达,探讨利用基因工程手段大规模生
【机 构】
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西北大学组织工程实验室,西安市太白北路229号,710069
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目的:人弹性蛋白生物相容性好、具有良好物理化学特性,是近年来生物材料研究领域的热点之一.研究通过建立类人弹性蛋白原核表达载体及诱导表达,探讨利用基因工程手段大规模生产类人弹性蛋白、制备支架材料的可行性.
方法:全基因合成上游引入NcoI和下游引入XhoI限制性内切酶位点的类人弹性蛋白核心序列[(VAPGVG) 3S]4的编码序列,通过定向递归连接技术构建[(VAPGVG)3S]32基因编码序列.利用NcoI和XhoI双酶切从重组克隆载体中回收[(VAPGVG)3S]32基因编码序列,与NcoI和XhoI双酶切处理的线性化载体DNA分子pET28a(+)重组,重组质粒在大肠杆菌BL21 (DE3)诱导表达,以SDS-PAGE及Western blotting分析表达结果.通过发酵、纯化获得类人弹性蛋白,冻干后获得支架材料.
结果:NcoI和XhoI双酶切分析及序列测定结果表明，利用定向递归连接技术成功将[(VAPGVG) 3S]4核心序列拷贝数渐次增加，并分别克隆至相应载体中。SDS-PAGE及Western blotting分析结果显[(VAPGVG) 3S]32基因编码序列在100Pg/mL IPTG诱导下，可以在宿主细胞BL21 (DE3)中高效表达。类人弹性蛋白冻干后，可以制备获得海绵状支架材料。
结论:利用定向递归连接技术可以方便构建任意长度类人弹性蛋白编码序列，构建的基因序列可以在大肠杆菌中高效表达，获得的类人弹性蛋白可被制成海绵状支架材料。
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