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microRNAs(miRNAs)是由21-25个核苷酸组成的非编码RNA,它通过与靶基因的3’-UTR的配对,促进mRNA的降解或抑制mRNA的翻译从而抑制其靶基因的表达。近年来,其与各种疾病的关系,尤其是与肿瘤的关系的研究成为热点。胰腺癌是临床上治疗困难的疾病,对人类的健康威胁极大,大量研究工作集中于胰腺癌的肿瘤编码基因的筛查和功能的鉴定,关于miRNAs与此疾病的关系知之甚少,研究miRNAs在胰腺癌发病机制中的作用具有重要的意义。本实验以临床上胰腺癌组织标本和国际上公认的ATCC胰腺癌细胞系Panc-1/Mia PaCa-2为实验对象,用miRNAs芯片筛查胰腺癌组织与正常胰腺组织中差异表达的miRNAs。设定阈值1.5倍,SAM软件分析找到32个差异表达的miRNAs,与对照组比较,其中上调的有18个,下调的有14个。Northern Blotting实验验证了部分的芯片结果：挑选了5个miRNAs分子,其中4个与芯片结果完全一致,一个结果有出入。依据K-RAS改变是胰腺癌中最典型的特征,并且是导致胰腺癌肿瘤恶性行为的一个关键因素,我们检测了胰腺癌细胞系中K-RAS蛋白水平,有文献报道K-RAS基因是let-7的一个靶基因,因此我们又检测了胰腺癌细胞系中let-7 miRNA的水平,发现与K-RAS的蛋白表达水平成负向关系；接着我们用let-7 miRNA直接导入胰腺癌细胞系Panc-1,检测到K-RAS的蛋白水平下降,而K-RAS的mRNA水平无明显变化,说明let-7的降低是胰腺癌中K-RAS蛋白升高的原因之一。我们又检测了胰腺癌细胞系以及正常胰腺组织中miR-96的表达水平,发现其在正常胰腺组织比胰腺癌细胞系中的表达下降。用质粒为载体在Mia PaCa-2细胞中高表达miR-96,结果发现K-RAS的mRNA水平不变、而蛋白水平下降,肿瘤细胞的恶性生物学行为(增殖、克隆形成能力、迁移和侵袭能力)受到了明显的抑制,同时肿瘤细胞凋亡增强；我们又检测了RAS下游通路中的两个重要分子ERK和AKT的表达有显著下降,它们的活化形式phospho-ERK和phospho-AKT也有不同程度的下降。生物信息学分析miR-96的前体序列发现,各物种间存在多个位点核苷酸的多态性,且位于前体的茎环结构区,但是成熟体的序列十分保守(>99%序列相同),小鼠的miR-96成熟体序列与人的序列完全一致,因此推测miR-96可能是进化过程中保留下来的具有肿瘤抑制功能的重要分子。综合前面的结果,我们得出在胰腺癌中miRNAs的表达存在差异,过表达miR-96能在细胞水平上抑制肿瘤的恶性生物学行为,let-7和miR-96的表达下降是胰腺癌的肿瘤恶性行为发展的一个因素,是阐明胰腺癌肿瘤分子机制的一个重要补充。