蜜蜂卵期发育基因敲除试验

来源 :2015中国遗传学会大会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lawrence121
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  本研究选取了几个重要的胚胎发育基因,分别构建了TALEN和CRISPR/Cas9打靶载体.采用单元组合法对En、Prd和Tll合成了TALEN靶位点的左臂和右臂,并体外转录合成了各自TALEN的mRNA;采用体外转录法对Dfd、Eve、Otd-1、Prd和Tll制备出含有CRISPR/Cas9靶位点的gRNA模板,并回收得到各自的Cas9/gRNA.利用显微注射技术将目标基因-TALEN mRNA或目标基因-Cas9/gRNA分别导入到意大利蜜蜂5-6h的卵中,在35℃下培养48-60h后,进行限制性内切酶酶切检测.结果显示:对目标基因-TALEN或目标基因-Cas9/gRNA扩增片段TA克隆测序后,发现Tll-TALEN和Otd-1-Cas9/gRNA都存在着单碱基突变,表明TALEN和CRISPR/Cas9编辑技术有望用在蜜蜂基因组中进行基因靶向诱变.
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