【摘 要】
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目的 探讨适用于小鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)分离培养及鉴定的技术方法.方法 采用Ⅰ型胶原酶、木瓜蛋白酶联合消化法及组织贴
【机 构】
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首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所 北京 100029
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目的 探讨适用于小鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)分离培养及鉴定的技术方法.方法 采用Ⅰ型胶原酶、木瓜蛋白酶联合消化法及组织贴块2种方法进行体外培养.在倒置显微镜下观察生长特点；台盼蓝法测定细胞传代成活率；分别对PASMCs行生长曲线、MTT法、DNA周期检测比较增殖情况；免疫荧光染色法鉴定细胞.结果 酶消化法分离培养的细胞1d后,在倒置相差显微镜下可见细胞贴壁呈椭圆形生长,4d后生长迅速呈典型的谷峰状生长,7d后达80％融合即可传代；贴块法培养的细胞3d后,可见细胞从组织块边缘长出,7d后细胞数量逐渐增多,10d后细胞生长迅速呈单层致密排列,细胞传代成活率均为96％.2种方法获得的第2代PASMCs经平滑肌α-肌动蛋白免疫荧光染色鉴定,其阳性率均为90％以上；生长曲线、MTT法显示细胞增殖及细胞DNA周期无明显差异.结论 2种方法均可高效获得小鼠肺动脉平滑肌细胞在体外稳定培养,为研究肺血管疾病提供较为理想的种子细胞.
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