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目的:建立高效液相色谱法测定人血清中羟氯喹浓度的方法,为临床监测血药浓度以调整羟氯喹的给药剂量提供方法学基础。方法:100μL血清样品经2倍乙腈沉淀后,取上清液进行HPLC分析。采用Agilent TC C18（2）色谱柱（4.6×150mm,5μm）,以乙腈-0.2 mol·L-1磷酸二氢钾（10:90,v/v,磷酸调pH=3.0）为流动相。检测波长为343nm,流速为1.0 mL·min-1。进样量150μL。随机选取12个长期（>3个月）服用相同剂量硫酸羟氯喹的系统性红斑狼疮患者进行羟氯喹血清谷浓度检测。结果:羟氯喹在205000 ng·mL-1,浓度范围内线性关系良好（r=0.9991）,定量限为20 ng.mL-1。批内批间精密度RSD均小于10.1%;提取回收率为92.1%98.4%。12名系统性红斑狼疮患者的羟氯喹平均血清谷浓度为（408.9±345.7）ng·mL-1。结论:高效液相法测定羟氯喹时,增加流动相中水相比例及酸含量,能使羟氯喹与血样中杂质较好分离,且峰型对称。本法操作简便,灵敏,准确度高,适用于临床羟氯喹血清药物浓度监测。患者羟氯喹血清谷浓度结果显示服用相同剂量硫酸羟氯喹的患者,其药物血清谷浓度差异较大。因此,对长期服药羟氯喹的系统性红斑狼疮患者伴随进行血药浓度检测,对药物剂量调整及整个治疗过程都具重要意义。