论文部分内容阅读
本实验室分离到一株具较强抑菌能力的海洋细菌,菌株编号为C11,16S rDNA序列分析结果表明该菌属于Bacillus subtilis.本文通过采用曲面响应方法对海洋细菌C11抑菌物质的发酵条件进行优化.研究表明该菌产生抑菌性物质的抑菌活性与其生长周期相关,对接种后的C11按0、1、2、4、8、10、12、20、24、36、48h收集发酵液进行抑菌试验,其抑菌能力有所差别.对细菌C11在添加不同外源信号分子之后的不同时间的发酵液进行抑菌性试验,结果表明该菌在外源信号分子诱导下的抑菌物质的抑菌活性存在差异,且抑菌活性也与发酵时间有关.为了对其抑菌物质产生机制进行更深入的研究,进行了在不同时期添加不同浓度梯度的ATP、Ca2+、H2O2以及黑曲霉、青霉、金黄色葡萄球菌菌体及发酵液的试验,通过检测其发酵液抑菌活性进而进行其抑菌物质产生机理的研究.海洋细菌C11在Landy培养基中,可产生大量脂肽类抗菌物质,发酵液经酸沉淀并将沉淀通过甲醇萃取后,进行薄层层析(TLC)检测(展开剂比例为CHC13：CH3OH∶ H2O =65∶24∶2)以及碘蒸汽显色可发现Rf=0.2,这与之前进行的排油圈法以及甲苯乳化法检测的发酵液中存在脂肽类物质的结果相吻合.大量收集萃取液,经SephadexG-25柱层析收集的活性组分再通过SephadexG-100柱层析,收集活性组分根据薄层层析(TLC)合并Rf相同的活性组分,经高效液相色谱系统(HPLC)梯度洗脱,(40％乙腈含0.1％三氟乙酸),溶液流速为0.25 ml/min,40℃,波长215nm紫外(UV)进行检测.对有活性的峰进行质谱检测,以确定其具体结构.对纯化后的抑菌产物进行热稳定性、蛋白酶稳定性、pH稳定性的试验并测定其抗菌谱.