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目的:探讨在RNA干扰技术条件上,干扰UL54基因表达对HSV-Ⅱ复制的影响及对宿主细胞的保护作用.
方法:体外合成针对UL54基因的四对siRNA和阳性、阴性对照siRNA,用Li pofectamine2000转染vexo细胞后接种HSV—Ⅱ,感染后分别于12h、24h、36h,48h、60h、72h测定上清液病毒滴度,MTT比色法测定细胞的存活情况.
结果: UL54基因特异性siRNA转染组在病毒复制早期(12-24小时)即出现明显的病毒滴度降低,病毒复制晚期,其病毒滴度仅稍微降低;各转染了特异性siRNA的细胞较空白组细胞病变出现迟,细胞存活情况较好,其中,R2和R4组在病毒复制早期到晚期病毒滴度均较其它组低,细胞病变出现也较迟.
结论:UL54基因特异性siRNA能够抑制HSV-Ⅱ的复制,降低子代病毒滴度,同时对宿主细胞具有保护作用。按照同样设计原则合成的不同序列siRNA,其抑制效果存在明显差异。