【摘 要】
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以小鼠胎儿和牛睾丸为材料,以含15％NBS,0.1 mMβ-巯基乙醇,0.1 μMNa2SeO3的DMEM溶液为培养液,分离获得了传15代的小鼠胎儿成纤维细胞和5代牛睾丸成纤维细胞,建立了小鼠和牛类
【机 构】
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西北农林科技大学家畜生殖内分泌与胚胎工程农业部重点开放实验室
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以小鼠胎儿和牛睾丸为材料,以含15％NBS,0.1 mMβ-巯基乙醇,0.1 μMNa2SeO3的DMEM溶液为培养液,分离获得了传15代的小鼠胎儿成纤维细胞和5代牛睾丸成纤维细胞,建立了小鼠和牛类ES细胞培养体系,结果表明:牛睾丸成纤维细胞和小鼠胎儿成纤维细胞均属附着生长型细胞,与小鼠胎儿成纤维细胞相比较,牛成纤维细胞直径和长度大,生长速度快,易于老化;12-16日龄的小鼠胎儿最适宜分离与克隆小鼠胎儿成纤维细胞;在25℃条件下,以0.25％胰蛋白酶+0.04％ED-TA消化液作用胎儿小块组织分离原代小鼠胎儿成纤维细胞,消化液作用时间不应超过20 min,以相同的消化液在37℃条件下,离散贴壁成纤维细胞,作用时间以2-3 min为宜;培养细胞密度与传代时间间隔有密切关系,若传代时间间隔为3-4 d,,培养细胞浓度应为3×105个/ml-5×105个/ml;在成纤维细胞分离与克隆过程中,培养基中添加0.1 μm Na2SeO3+0.1 mM β-巯基乙醇+15％NBS,有利于MEF和NBTF的增殖.
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