四乙胺阻断大电导钙激活钾通道对血管平滑肌细胞增殖的影响及其机制研究

• 作 者: 杨国勋;李志;刘唐威;钱静;农丹鹏;
• 机 构: 广西医科大学第一附属医院高血压病区 530021
• 出 处: 中华医学会第十五次全国心血管病学大会
• 发表日期: 2013年期

目的：观察四乙胺(TEA)阻断大电导钙激活钾通道(BKCa)后对体外培养兔主动脉血管平滑肌细胞增殖以及Ras—Raf-MEK—ERK／MAPK信号途径的影响.方法：体外培养家兔胸主动脉平滑肌细胞(VSMC)，分别加入浓度为0μmol/L,100μmo1/L,200μmo1/L,400μmo1/L的TEA干预VSMC生长24,48,72小时，浓度0μmol/L为正常对照组。采用曝哇蓝比色法(MTT)测定吸光度值并计算细胞抑制率;流式细胞术测定细胞周期;免疫组织化学法检查增殖细胞核抗原(PCIQA)蛋白的表达;免疫印迹法检测细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(P-ERK1/2)水平的变化。结果:培养的VSMC呈梭形，有典型的“峰谷样”生长，a-acrin免疫细胞化学染色呈阳性。MTT法检测表明，在不同浓度TEA处理不同时间下，各组血管平滑肌细胞吸光度值与正常组相比明显降低(P<0.01)，并随TEA浓度的增加以及作用时间的延长，吸光度值逐渐减少(P<0.01)，细胞抑制率逐渐上升(P<0.01)。流式细胞术分选结果显示VSMC经不同浓度TEA处理24小时后，与正常组比较，各浓度组G1期所占的百分比升高，而S期、G2期细胞所占百分比下降(P<0.01)，且随着浓度的增加差异更加明显(P<0.01)。经TEA处理后的VSMC PCNA蛋白阳性表达率较正常对照组显著下降，且随浓度的增加表达率逐渐下降(P<0.01)。经400μmol/L的TEA处理48小时后，与不经TEA处理正常组比较，ERK1/2,P-ERK1/2蛋白表达，ERK活化率均无显著性差异(P>0.05).结论：TEA可呈浓度依赖性阻滞VSMC由G0/G1向S期推进，抑制VSMC的增殖;其机制不经由Ras-Raf-MEK-ERK/MAPK信号途径介导。