多重实时定量PCR鉴别诊断猪传染性胸膜肺炎和猪圆环病毒Ⅱ型方法的建立

• 作 者: 谢芝勋[1]黄琦[2]庞耀珊[1]刘加波[1]邓显文[1]谢志勤[1]谢丽基[1]
• 机 构: 广西兽医研究所,广西 南宁 530001
• 出 处: 中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会
• 发表日期: 2009年期

以胸膜肺炎放线杆菌(APP)apxIVA和猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)ORF2为靶基因，根据其核苷酸序列分别设计高度特异性的引物和标记不同荧光报告基团的TaqMan探针，扩增片段大小分别为132bp和169bp，将其克隆到pMD-18T载体中，作为阳性标准品。经荧光PCR扩增获得两条标准曲线，建立了检测APP和PCV2的双重荧光PCR方法。该法可在同一反应体系中同时对APP和PCV2进行定量检测，对其它猪源性的致病菌和病毒的扩增均为阴性。检测DNA的敏感性分别达到1×10(1)拷贝和1×10(0)拷贝，在早期快速诊断和病原筛查上具有重要的意义。