羊布鲁菌外膜蛋白Omp25d的原核表达,鉴定及纯化

• 作 者: 张蕾[1]张芳琳[2]张亮[1]李璞媛[1]李凯[1]梓谕[1]吴兴安[1]徐志凯[1]白文涛[1]
• 机 构: 第四军医大学微生物学教研室,陕西,西安,710032
• 出 处: 第七次全国医学分子微生物学及生物技术研讨会
• 发表日期: 2009年期

目的：研究羊布鲁菌外膜蛋白Omp25d基因的克隆，原核表达，以及纯化。
方法：根据羊布鲁菌M5株外膜蛋白Omp25d蛋白基因序列设计引物.扩增出大小约为650bp的目的基因片断，克隆入融合表达载体pGEX-4T-1，构建重组质粒pGEX-4T-1—Omp25d。在大肠杆菌中将该蛋白表达并用亲和层析法纯化。用Western—blot分析方法鉴定GST—Omp25d蛋白。
结果：成功构建了pGEX-4T-1—Omp25d原核表达载体并在大肠杆菌中表达了Omp25d基因,纯化后所获得的融合蛋白与兔抗布鲁菌血清发生特异性反应。
结论：本研究成功构建了pGEX-4T—1—Omp25d元和表达载体，并且在大肠杆菌中进行表达，纯化的融合蛋白具有良好的免疫原性。