【摘 要】
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目的:研究氧化苦参碱(OMT)对醛固酮(ALD)诱导心肌成纤维细胞(CFs)增殖的作用,并分析其对p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)表达的影响.方法:采用胰酶消化法和差速贴壁法分离
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目的:研究氧化苦参碱(OMT)对醛固酮(ALD)诱导心肌成纤维细胞(CFs)增殖的作用,并分析其对p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)表达的影响.方法:采用胰酶消化法和差速贴壁法分离纯化1~3d新SD生大鼠CFs做原代培养,建立ALD诱导CFs增殖模型.ALD诱导CFs量效实验分为:空白组(无血清DMEM)、ALD1×10-10 ALDmol·L-1、1×10-9 ALDmol·L-1、1×10-8 ALDmol·L-1及1×10-7 ALDmol·L-1组.ALD诱导CFs时效实验分为:空白组(无血清DMEM)和ALD组(1×10-7 ALDmol·L-1),作用时间分别为12 h、24h、36 h、48 h.OMT抑制ALD诱导CFs增殖实验分为空白组(无血清DMEM),ALD组(1×10-7 ALDmol·L-1),OMT低、高剂量组(3.78×10-4,7.57×10-4 ALDmol·L-1).倒置显微镜下观察原代CFs.波形蛋白DAB染色法联合免疫细胞化学染色SP法鉴定CFs.采用噻唑蓝(MTT)法分析ALD对CFs增殖的量效与时效关系和OMT的抑制作用.实时荧光定量PCR分析p38MAPK mRNA的表达.Western blot分析p-p38MAPK,p38MAPK的蛋白表达.结果:MTT结果提示1×10-7 mol·L-1ALD能够诱导CFs的增殖,且在24h时增殖作用显著,7.57×10-4 mol·L-1 OMT可显著抑制CFs增殖.OMT对p38MAPK mRNA的水平未见显著影响.OMT能够抑制p-p38MAPK蛋白的表达.结论:OMT可抑制ALD诱导CFs增殖的作用,其机制可能与抑制p38MAPK磷酸化有关.
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