【摘 要】
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背景与目的:细胞凋亡是细胞在细胞外或细胞内信号诱导下发生的主动自杀死亡过程.目前认为,肿瘤的发生发展不仅是细胞增殖失控、分化异常的结果,而且与细胞凋亡失衡有关.因此,研究肿瘤中与凋亡相关基因的功能及机制,具有十分重要的意义.BAG-1是一个多功能抗凋亡蛋白,它能与多种细胞内分子结合而调节细胞凋亡、增殖、转录、转移和活力等.本研究的目的是:探讨利用RNAi技术敲除BAG-1表达后对肺癌细胞生物学行为
【机 构】
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天津医科大学总医院 天津市肺癌研究所
【出 处】
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中国抗癌学会肺癌专业委员会第十二届全国肺癌学术大会
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背景与目的:细胞凋亡是细胞在细胞外或细胞内信号诱导下发生的主动自杀死亡过程.目前认为,肿瘤的发生发展不仅是细胞增殖失控、分化异常的结果,而且与细胞凋亡失衡有关.因此,研究肿瘤中与凋亡相关基因的功能及机制,具有十分重要的意义.BAG-1是一个多功能抗凋亡蛋白,它能与多种细胞内分子结合而调节细胞凋亡、增殖、转录、转移和活力等.本研究的目的是:探讨利用RNAi技术敲除BAG-1表达后对肺癌细胞生物学行为的影响，初步研究BAG-1对细胞信号通路的调节作用。
方法:(1)阳离子脂质体瞬时转染BAG-1-siRNA短双链片段，Western Blot及实时定量PCR进行验证BAG-1蛋白水平及mRNA水平干扰效率;(2)应用MTT及流式细胞仪(flow cytometry,FCM)分别比较转染BAG-1和negative contol-siRNA的A549细胞对顺铂敏感性的差异;
结果:(1)siRNA成功干扰人肺腺癌细胞株A549中BAG-1基因及蛋白表达; (2)MTT检测得出经不同浓度梯度(0-40μg/ml)顺铂处理后A549-siRNA肺癌细胞株细胞活力分别为(76.861±17.67)％，(47.94±3.28)%，(45.82±2.48)%，(32.94±3.9)%和(28.16±1.8)%;A549-BAG-1-siRNA肺癌细胞株细胞活力分别为(44.37±22.49)%,(37.15±9.79)%，(33.33±6.81)%,(26.54±8.32)%和(20.81±4.24)%，经统计学分析差异具有显著性(P=0.000);
结论:(1)短片段干扰RNA能有效沉默目的基因，引起该基因的基因和蛋白水平降低;(2)BAG-1基因沉默后可增加人肺癌细胞株A549对顺铂的敏感性，而不会影响细胞周期;(3)人肺癌细胞株A549中，BAG-1可能参与MAPK等信号通路的调节;(4)BAG-1参与EGFR、LYN、JCJN、HRAS和HSPAlA等基因的表达。
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