【摘 要】
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许多乳酸菌都携带不同的质粒.本文从分离自内蒙古传统乳制品中的干酪乳杆菌LC2W(CP002616)中得到了一个天然质粒pLC2W.该质粒大小为38,392bp,GC含量为42.64％.对其进行复制
【机 构】
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上海理工大学医疗器械与食品学院 上海200093
【出 处】
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中国食品科学技术学会第十二届年会暨第八届中美食品业高层论坛
论文部分内容阅读
许多乳酸菌都携带不同的质粒.本文从分离自内蒙古传统乳制品中的干酪乳杆菌LC2W(CP002616)中得到了一个天然质粒pLC2W.该质粒大小为38,392bp,GC含量为42.64％.对其进行复制区分析,通过绘制进化树,同源比对得出该质粒得复制方式为滚环复制.初步推断与复制有关得区域共包括4个蛋白,为了分析最短有效复制区,将不同长度复制区与pUC19构建出五个穿梭质粒(pUE-F0,pUE-F1,pUE-F2,pUE-F3,pUE-F4),并将其分别转化干酪乳杆菌LC2W.实验证明,除了pUE-F4外,其余质粒都能够成功转化.这些穿梭质粒能够成功转化Lactobacillus casei LC2W, Lactobacillus casei AR341,and Lactobacillus paracasei(AR93).转化效率从6* 104到2.35*1 05(个/ugDNA).在无抗条件下传代以进行稳定性实验,pUE-F0,pUE-F1,pUE-F2,pUE-F3并无明显差异,结合转化实验得出最短有效复制区为ori+repA.在穿梭质粒的基础上加上启动子p23和荧光表达蛋白GFP,进一步构建乳酸菌表达载体pUE-F1-P23-GFP,并用其转化不同的乳酸菌,成功获得了荧光蛋白表达.该质粒为乳酸菌基因操作提供了新的工具.
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