【摘 要】
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雷莫拉宁是由游动放线菌产生的具有新型结构的脂肽类抗生素，其对于抗万古霉素肠球菌感染的治疗现在处于Ⅲ期临床阶段。雷莫拉宁的肽链骨架是由非核糖体合成酶(NRPS)负责合成。据文献推测，一个单独的NRPS蛋白Ramo-orf17可能负责线性NRPS蛋白Ramo-orf13中第6个模块对苏氨酸的活化和上载，但是并没有任何的实验证据证明。本文利用同源重组双交换和位点特异性插入等方法，系统地进行了体内的基因敲
【机 构】
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State Key Lab of New Drug and Pharmaceutical Process,Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry,S
【出 处】
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上海市药学会抗生素专业委员会首届青年学术论坛
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雷莫拉宁是由游动放线菌产生的具有新型结构的脂肽类抗生素，其对于抗万古霉素肠球菌感染的治疗现在处于Ⅲ期临床阶段。雷莫拉宁的肽链骨架是由非核糖体合成酶(NRPS)负责合成。据文献推测，一个单独的NRPS蛋白Ramo-orf17可能负责线性NRPS蛋白Ramo-orf13中第6个模块对苏氨酸的活化和上载，但是并没有任何的实验证据证明。本文利用同源重组双交换和位点特异性插入等方法，系统地进行了体内的基因敲除和基因回补实验。并构建了一个的含有Ramo-orf17的N端区域和另一个NRPS的腺苷化域-肽基载体蛋白区域的杂合蛋白的编码基因，在基因同补实验中成功恢复了雷莫拉宁的产生。这些结果首次证明了Ramo-orf17的作用，并发现这个NRPS蛋白的N端区域在雷莫拉宁的生物合成中至关重要。
其他文献
本文应用LC-MS/MS技术对注射用氨曲南样品中的11种杂质进行了快速鉴定。以0.02M甲酸铵溶液(用甲酸调节pH至3.0)-乙腈为流动相经C18柱分离，通过电喷雾串联负离子在线检测，获得各个杂质相对分子质量信息和碎片信息，对各杂质结构进行了鉴定。在所建立条件下，氨曲南及其杂质均能得到有效分离。11种杂质按保留时间从小到大分别为开环脱磺酸氨曲南、氨曲南开环与精氨酸聚合物、氨曲南开环与精氨酸聚合物异
本文了研究并优化了七种不同基质中四环素、土霉素、金霉素、多西环素残留的超高效液相色谱-串联质谱检测方法。在参考和改进现有标准的基础上,本方法对猪肉、鸡肉、鸡蛋、鱼肉、牛奶、猪肝、猪肾等基质中的四环素类残留,选用Na2EDTA-McIlvaine缓冲溶液作为提取液进行超声提取,经C18固相萃取小柱净化,脱溶剂后用甲醇水溶解,在超高效液相色谱-串联质谱上进行检测。各基质中四环素类残留在10μg/Kg～
方法采用二硫赤藓糖醇将头孢噻呋分解为脱呋喃甲酸头孢噻呋(desfuroyleceftiofur,DFC),再由碘乙酰胺衍生化为稳定的DFC乙酰胺形式(desfuroylceftiofur-acetamide,DCA),再经固相萃取柱净化之后进行测定。以乙腈-水(12∶88)为流动相,m/z487.0＞241.0为定量离子对采用超高效液相色谱-串联质谱法测定牛奶中头孢噻呋及相关代谢物的残留。本方法在
了解上海地区规模化猪场分离的大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的分离率、耐药性和基因型。收集2010年9月～2011年3月从上海地区10个规模化养猪场分离的296株大肠埃希菌,采用微量肉汤稀释法进行药敏试验,采用PCR技术分别检测TEM、CTX-M、OXA和SHV基因。在296株大肠埃希菌中,有52株大肠埃希菌产ESBLs,产酶率为17.6％。在52株ESBLs菌株中,有46株为TEM型
建立了检测猪肉中5种α2受体激动剂的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC/MS/MS)分析方法。样品加入碱性缓冲液,在再经过乙酸乙酯提取,浓缩、净化后用乙腈-0.2％甲酸溶解,经超高效液相色谱-串联质谱在多反应检测(MRM)模式下测定。结果显示盐酸可乐定等5种Alpha受体激动剂标准曲线在0.5～100μg/L浓度范围内线性良好。线性相关系数(r)均大于0.99；在1～50μg/kg添加水平下,5种
以氢化大豆卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰甘油和胆固醇作为脂质膜材,采用薄膜水化法、高压均质法结合挤出法制备注射用两性霉素B脂质体。以平均粒径和有关物质作为筛选指标优化了制备工艺。按照优化工艺制备的注射用两性霉素B脂质体的平均粒径为88±9 nm,杂质总量和最大单个杂质分别为5.4％和1.2％,包封率为97.9％。
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本实验室将含假单胞菌头孢菌素C(CPC)酰基转移酶基因ecs的pYG233质粒转入产黄顶头孢霉(Cephalosporium acremonium)中构建可生产7-ACA(7-氨基头孢烷酸)的基因工程菌株，该菌株含有phleo(腐草霉素)抗性标记。本实验以本实验室构建的该基因工程菌株作为第一亲本，并构建含有质粒pYG236的hygB(潮霉素)抗性标记菌株作为第二亲本进行基因组改组，以含有双重标记抗
敲除雷莫拉宁生物合成基因簇中orf29,所得的突变株能够发酵产生无糖雷莫拉宁,但其功能还未确定。本研究为了验证orf9的体内功能,在大肠杆菌中构建orf29回补质粒pSET152/PermE*/ramo-orf29,将其转入敲除了orf29的雷莫拉宁产生菌突变株SIPI-A.2006Δorf29中,通过同源重组单交换的方法构建orf29回补突变株。经发酵验证,突变株发酵产物中检测到有雷莫拉宁产生,
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