蛋白磷酸酶2A催化亚基α在小鼠胚胎成纤维细胞迁移中的作用研究

• 作 者: 王庆华 王生存 李斌 刘春 吴刘成 王旭 彭晓清 邵义祥
• 机 构: 南通大学实验动物中心,江苏南通226001 南通大学附属医院儿科,江苏南通226001
• 出 处: 华东地区第十四届实验动物科学学术交流会
• 发表日期: 2016年11期
• 关键词: 蛋白磷酸酶2A 胚胎成纤维细胞 细胞迁移 细胞周期 小鼠

　　目的 利用体外基因敲除技术,检测小鼠胚胎成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblasts,MEFs)周期和迁移能力的变化,探究蛋白磷酸酶2A的Cα亚基在MEFs细胞迁移过程中的作用.方法 用Cαfl/fl的纯合子雄鼠与雌鼠1∶2配对,取E12.5天的小鼠胚胎制作胚胎成纤维细胞.利用表达Cre重组酶(Ad-Cre-EGFP)以及GFP荧光蛋白(Ad-EGFP)的腺病毒载体,对P3代MEFs进行感染,用PCR,RT-PCR和western方法进行基因型鉴定.同时感染后MEFs利用流式分选技术检测其细胞周期的变化,利用细胞划痕实验检测了其细胞迁移能力的变化.结果 胰酶消化的方法成功获得了小鼠胚胎成纤维细胞,DNA,RNA和蛋白水平的鉴定获得了3对3的野生型和基因敲除MEFs.