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人和动物粪便的任意排放对河流、湖泊、以及海洋造成的污染已经成为很大的环境问题。但传统方法只能指示水体受粪便污染的程度，却不能识别真正来源，为环境管理带来了困难。为解决这一问题，细菌源示踪技术近十几年在欧美等国得到了广泛发展，但在我国仍处于起步阶段。本研究初步建立不同物种源肠球菌抗生素抗性指纹图谱库并对其准确性进行验证，以期推动抗生素抗性分析法细菌源示踪技术在我国的发展，提高水域环境管理水平。选取大连为试验区域，采集五种不同动物(人、狗，鸡、牛、猪)的新鲜粪便样本，分离并确认指示茵肠球菌，采用Kirby-Bauer药敏纸片扩散法对十种抗生素进行抗J陛分析，建立646株肠球菌抗生素抗性指纹图谱数据库；用SPSS15.0软件对指纹图谱库进行判别分析。结果显示五物种源分类模式源验证和交叉验证的平均正确识别率分别为52.9％和52.2％，平均错误判别率为12％，实践应用的最低判别限值为26％；人源和动物源的二分类模式源验证和交叉验证的平均正确识别率均为69.9％，平均错误判别率和实践应用的最低判别限值均为31％。由此可得建立的肠球菌抗生素抗性指纹图谱库代表性和判别准确性良好，可以将不同源指示茵区分开；人源和动物源分类模式比物种源模式的判别准确性更好，但因其溯源到物种的能力有限，在实践应用中应根据具体情况合理选择。本研究为将该数据库应用于大连自然水体粪便污染溯源打下了重要基础。