基于通用引物PCR以及多重PCR方法的五种生物恐怖细菌悬浮芯片检测模型的建立以及初步评价

来源 :第十一届中国科协年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhaocd
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目的:分别运用引物PCR和多重PCR方法结合编码微球悬浮芯片技术,建立炭疽芽胞杆菌(Bacillusanthracis,B.a)、鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis Y.p)、布鲁菌(Brucellaspp.Bru)、上拉弗朗西斯菌(Francisella tularensis、Ft)和类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei,B.)的通用型基悬浮芯片和多垂PCR悬浮芯片检测模型,用于生物恐怖细菌的快速、高通量筛检。方法:针对几种生物恐怖细菌的16SrDNA序列,设计种/属特异性探针,选择16SrDNA通用引物341a,519b扩增基因组DNA,建立通用型基因悬浮芯片方法;针对几种细菌特异性基因序列设计6对引物和相应的特异性探针,经多重PCR扩增并用生物素标记相应的基因片段,建立基于多重PCR的悬浮芯片检测方法:并通过对白色粉末介质中模拟添加目的菌进行检测,考察了两种方法对实际样本的检测能力。结果:基于多重PCR的悬浮芯片检测体系能够正确的捡测和鉴定五种生物恐怖因子,通用型基因悬浮芯片仅能在属的水平对五种生物恐怖因子进行鉴定,两种方法检测灵敏度相似,均能满足恐怖样本的高通量筛查。结论:建立了五种生物恐怖因子通用基因悬浮芯片和基于多重PCR的基因悬浮芯片的快速检测方法。
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