【摘 要】
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[目的]构建大肠杆菌粘附素AIDA-Ⅰ的表达载体,并研究其免疫原性.[方法]利用PCR技术扩增粘附素aidA基因,将其定向插入表达质粒pET-30a(+),在E.coli BL21(DE3)大肠杆菌中IP
【机 构】
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浙江大学动物科学学院,浙江杭州310058
【出 处】
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2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会
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[目的]构建大肠杆菌粘附素AIDA-Ⅰ的表达载体,并研究其免疫原性.[方法]利用PCR技术扩增粘附素aidA基因,将其定向插入表达质粒pET-30a(+),在E.coli BL21(DE3)大肠杆菌中IPTG诱导表达,并通过免疫小鼠制备多克隆抗体,对血清进行抗体检测,最后采用免疫印迹试验研究其免疫原性.[结果]克隆的粘附素aidA基因序列与genbank公布的E.coli 2787同源性高达91％.破菌后SDS-PAGE电泳证实目的蛋白均以包涵体形式表达.包涵体复性后用目的蛋白包被96孔板,ELISA检测表明,免疫小鼠血清抗体效价达1∶25600.进一步的Western blot免疫印迹试验证实,该重组蛋白分子量约为131KDa,可被AIDA-Ⅰ免疫小鼠血清所识别.[结论]aidA基因成功克隆和在E.coli BL21(DE3)中高效表达,且所得目的蛋白具有良好的免疫原性,对aidA基因工程疫苗的研制及其粘附机制的研究具有重要意义.
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