猪主要DNA病毒多重二温式PCR检测方法的建立及初步应用

• 作 者: 申世川[1]王一成[2]姜平[3]袁秀芳[2]徐丽华[2]李军星[2]
• 机 构: 南京农业大学动物医学院,江苏南京,210095 浙江省农业科学院畜牧兽医研究所,浙江杭州,310021
• 出 处: 第六届南京农业大学畜牧兽医学术年会——猪禽疫病综合防控研讨会
• 发表日期: 2012年期

　　本文通过对GenBank发布的猪细小病毒(PPV)、伪狂犬病毒(PRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的核苷酸序列进行比对分析,找出PPV的VP2基因,PRV的gH基因和PCV2的ORF2基因的相对保守区域。利用生物学软件在保守序列分别设计高溶解温度引物,将常规三温式PCR过程中的退火与延伸合并为一步,通过对PCR反应条件的优化,确定最佳引物浓度、最佳聚合酶浓度、最佳退火温度以及最佳反应体积,建立了多重二温式PCR方法检测PPV、PRV和PCV2,其扩增的目的片断大小分别为PPV(142 bp)、PRV(300 bp)和PCV2(469 bp),从而节省临床检测时间,同时又能通过一个反应体系对PPV、PRV和PCV2 3种猪主要DNA病毒进行检测。用30份临床病料对本研究多重PCR技术和单项PCR技术进行对比验证,结果显示,两者的总符合率为95%以上。表明建立的多重PCR检测方法,具有高度特异、快速、敏感等特点,可用于对这3种病毒的同时检测和鉴别诊断。