【摘 要】
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目的:采用基因介入治疗技术针对AFP阳性肝癌提出有效可行的治疗方法,使治疗基因产物专一地杀伤肝癌细胞,而不损害正常的肝脏细胞及其他正常细胞,提高治疗效果,避免毒副作用.方法:将AFP启动子、沉默子和远端增强子Ⅲ组合为1.2kb的AFP基因调控序列,去除pEGFP—N1质粒的CMV启动子序列,连接AFP基因调控序列作为新的启动子,构建pAFP—EGFP载体.将构建好的pAFP—EGFP分别转染Hep
【机 构】
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河北医科大学实验动物学部,河北 石家庄 050017
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目的:采用基因介入治疗技术针对AFP阳性肝癌提出有效可行的治疗方法,使治疗基因产物专一地杀伤肝癌细胞,而不损害正常的肝脏细胞及其他正常细胞,提高治疗效果,避免毒副作用.
方法:将AFP启动子、沉默子和远端增强子Ⅲ组合为1.2kb的AFP基因调控序列,去除pEGFP—N1质粒的CMV启动子序列,连接AFP基因调控序列作为新的启动子,构建pAFP—EGFP载体.将构建好的pAFP—EGFP分别转染HepG2、SMMC7721、HeLa细胞,荧光显微镜下观察荧光蛋白表达强度.引入P53基因片段,构建pAFP—P53-EGFP重组质粒,转染HepG2、SMMC7721、HeLa细胞,以未转染的HepG2、SMMC7721、HeLa细胞做对照,用Westernblot方法检测P53蛋白表达量的差异,流式细胞仪分析各组细胞周期和凋亡率.
结果:pAFP—EGFP构建成功且在HepG2、SMMC7721、HeLa细胞中荧光蛋白表达强度具有显著性差异.pAFP—P53-EGFP重组质粒转染HepG2、SMMC7721、HeLa细胞,HepG2细胞P53蛋白的表达量要明显高于转染的SMMC7721、HeLa细胞及未转染的HepG2、SM MC7721、HeLa细胞.流式细胞分析法检测转染pAFP—P53-EGFP重组质粒的HepG2细胞凋亡率及G1期细胞高于SMMC7721、HeLa细胞,差异显著(p<0.05).而HepG2的S期细胞明显低于SMMC7721、HeLa细胞(p<0.05).
结论:pAFP—EGFP和pAFP—P53-EGFP可以在AFP阳性细胞中相对专一表达,并且pAFP—P53-EGFP可相对专一的诱导AFP阳性细胞凋亡及G1期细胞周期阻滞.
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