【摘 要】
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目的:以腺相关病毒(AAV)为载体,将双突变的二氢叶酸还原酶(mDHFR)和绿色荧光蛋白(GFP)融合基因导入外周血造血干细胞,达到保护机体造血功能的目的,同时建立一个简便、易行的
【机 构】
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南方医科大学南方医院 广州 510515
【出 处】
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第二届广州肿瘤大会——首届“CSCO-南方”肿瘤生物治疗与分子靶向治疗论坛、第六届全国肿瘤综合诊疗新进展研讨会
论文部分内容阅读
目的:以腺相关病毒(AAV)为载体,将双突变的二氢叶酸还原酶(mDHFR)和绿色荧光蛋白(GFP)融合基因导入外周血造血干细胞,达到保护机体造血功能的目的,同时建立一个简便、易行的检测目的基因的体系。
方法:构建携带人mDHFR和GFP融合基因的重组腺相关病毒载体(rAAV/mDHFR-GFP),包装成重组病毒:将重组病毒感染人外周血来源的CD34<+>细胞,PCR、RT-PCR检测转染细胞的基因转染情况,MTT法检测转基因组与未转基因组耐药性差异,流式细胞仪和荧光显微镜观察基因转染率。
结果:成功构建了rAAV/mDHFR-GFP重组载体并表达。PCR证实腺相关病毒载体可将mDHFR-GFPcDNA导入外周血造血干祖细胞。RT-PCR证实病毒转染后的CD34<+>细胞中有mDHFR和GFPmRNA的存在,MTT法证实转基因细胞耐药性较未转基因细胞有一定提高。rAAv/mDHFR-GFP重组病毒感染外周血CD34<+>细胞,感染率可高达25％,外周血CD34<+>细胞中可见绿色荧光蛋白表达。
结论:腺相关病毒载体可将mDHFR-GFP融合基因成功导入外周血干祖细胞,转入的目的基因在靶细胞中可有效表达,产生相应有功能的物质(包括蛋白质),使经转染的外周血干祖细胞对MTX的耐药性增强,今后仍需进一步改善AAV结构、包装系统和基因转染技术,以提高基因转导效率。
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