【摘 要】
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目的 探讨化瘀通络方对肺癌微环境中树突状细胞发育成熟的免疫激活作用及其相关机制.方法 将培养的DC2.4细胞随机分为阴性对照组、空白对照组、实验组、阳性对照组(Wnt/β-catenin通路激活剂SB216763),除阴性对照组外其余组均与Lewis肺癌细胞上清液共培养,48h后各组分别加入不同药物,再次作用后电子显微镜观察细胞形态学变化、MTT法检测细胞存活率、western-blot检测Wnt
【机 构】
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西安交通大学第一附属医院 西安市,7100611 西安市第五医院 西安市,7100611
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目的 探讨化瘀通络方对肺癌微环境中树突状细胞发育成熟的免疫激活作用及其相关机制.方法 将培养的DC2.4细胞随机分为阴性对照组、空白对照组、实验组、阳性对照组(Wnt/β-catenin通路激活剂SB216763),除阴性对照组外其余组均与Lewis肺癌细胞上清液共培养,48h后各组分别加入不同药物,再次作用后电子显微镜观察细胞形态学变化、MTT法检测细胞存活率、western-blot检测Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin蛋白表达.结果 (1)加入肺癌细胞上清液的DC2.4,其细胞数量明显减少,细胞呈不规则菱形、梭形,细胞周围树突状毛刺较少,有少量漂浮的死细胞,而加化瘀含药血清及SB216763作用后DC2.4变大,树突状毛刺增多,胞内可见点状颗粒,与典型的mDC2.4形态相似.(2)MTT检测DC2.4存活率结果显示：SB216763组及空白、低、中、高剂量含药血清组DC2.4存活率明显高于加入肺癌细胞上清液的空白对照组(P＜0.05),且SB216763组及低、中、高剂量血清组比空白血清组更加明显(P＜ 0.05),随着药物浓度加大,细胞存活率越高,具有一定的剂量依赖性.(3)Western-blot结果显示：加入肺癌上清液后DC2.4中β-catenin蛋白表达明显下降(P＜0.05),而经过化瘀通络方作用后,可见β-catenin蛋白表达升高,随着含药血清剂量加大,β-catenin蛋白表达量明显上调(P＜ 0.05).结论(1)肺癌微环境对DC2.4的生长发育有显著的抑制作用,这可能是肺癌产生免疫逃逸的机制之一.(2)化瘀通络方对肺癌微环境中DC2.4的形态改变、数量抑制具有明显的拮抗作用.(3)化瘀通络方对肺癌微环境中DC2.4Wnt/β-catenin信号通路中的β-catenin蛋白有上调作用,因此化瘀通络方激活DC2.4的分子机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关.
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