【摘 要】
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背景：我们前期研究发现川芎嗪可以通过抑制肝星状细胞的增殖、阻抑p38MARK信号通路、下调结缔组织生长因子的表达等多途径发挥抗肝纤维化的作用.一般认为TGF-β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)是促进纤维化发生发展最重要的细胞因子,而结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)是TGF-β1的下游效应介质,
【机 构】
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重庆医科大学附属第二医院消化内科,400010 重庆医科大学附属口腔医院口腔内科,401147
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背景：我们前期研究发现川芎嗪可以通过抑制肝星状细胞的增殖、阻抑p38MARK信号通路、下调结缔组织生长因子的表达等多途径发挥抗肝纤维化的作用.一般认为TGF-β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)是促进纤维化发生发展最重要的细胞因子,而结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)是TGF-β1的下游效应介质,siRNA靶向抑制TGF-β1可能成为治疗肝纤维化的新方法.目的：研究川芎嗪及化学合成的siRNATGF-β1对大鼠肝星状细胞CTGF表达的影响.方法：体外培养大鼠肝星状细胞,从3条siRNATGF-β1中筛选一条有效的基因沉默片段,然后利用脂质体转染试剂共同转染培养24h的细胞作为转染组(S),并设计空白对照组(B)、转染试剂组(R)、川芎嗪组(T)及联合治疗组(S+T).收集孵育72h的HSC及培养上清液,采用RT-PCR法、Western blot分别检测细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原及CTGFmRNA的表达、CTGF蛋白表达,ELISA法检测培养上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量.结果：与空白对照组相比,转染组Ⅰ、Ⅲ型胶原及CTGFmRNA表达分别下调(19±3％、32±2％、14±4％,p＜0.05-0.01),川芎嗪组分别下调(30±2％、51±2％、25±3％,p＜0.05-0.01),联合治疗组分别下调(37±5％、56±3％、36±3％,p＜0.05-0.01)；空白对照组和转染试剂组比较,两组Ⅰ、Ⅲ型胶原及CTGFmRNA表达差异无显著性意义(P＞0.05).在转染组、川芎嗪组及联合治疗组,CTGF蛋白表达分别下调(16.2±3％、25.2±3％、41.6±4％,p＜0.05-0.01)；培养上清液中Ⅰ型胶原胶原含量分别降低(6.1±5％、12±6％、15±5％,p＜0.05-0.01),Ⅲ型胶原胶原含量分别降低(13±3％、24±4％、41±2％,p＜0.05-0.01).结论：siRNA沉默TGF-β1基因能下调CTGF的表达,减少Ⅰ、Ⅲ胶原的表达.川芎嗪也能下调CTGF的表达,但对Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的抑制作用更加显著,提示川芎嗪抗肝纤维化可能是多种作用靶点.
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