【摘 要】
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目的:以猪ADIPOQ基因为靶基因,构建特异性的短发夹样RNA(Short Hairpin RNA,shRNA)真核表达载体,并转染前体脂肪细胞,为研究该基因对前体脂肪细胞分化机制奠定基础.方法:根据
【机 构】
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吉林大学动物科学学院,吉林 长春 130062
【出 处】
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2013年中国畜牧兽医学会养猪学分会学术研讨会
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目的:以猪ADIPOQ基因为靶基因,构建特异性的短发夹样RNA(Short Hairpin RNA,shRNA)真核表达载体,并转染前体脂肪细胞,为研究该基因对前体脂肪细胞分化机制奠定基础.方法:根据Cenbank提供的猪ADIPOQ基因序列及shRNA设计原则,化学合成4段编码短发夹RNA的寡核苷酸序列,将其定向克隆到pGPU6/GFP/Neo中U6启动子的下游,转化DH5α菌株,双酶切鉴定正确后进行测序,将构建好的真核表达载体转染前体脂肪细胞,并对条件进行优化.结果:限制性内切酶PstI和BamHI酶切显示设计合成的shRNA编码序列被成功插入pGPU6/GFP/Neo质粒中,测序结果显示插入片断与设计序列完全一致,证明重组质粒构建成功,转入到前体脂肪细胞中,可以看见绿色荧光蛋白表达.当质粒浓度0.6μg,脂质体2000是1.2μL,两者质量/体积比为1:2时,此时转染效率最高,达到53.9％.结论:成功构建了猪ADIPOQ基因的shRNA真核表达载体,并成功将该质粒转入猪的前体脂肪细胞中去,还对质粒与脂质体2000用量比条件进行了优化,此举能为进一步研究ADWOQ在猪前体脂肪细胞中的功能奠定了良好的基础.
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