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目的：采用骨髓间充质干细胞(MSCs)体外诱导PBMCs产生RegC,确定RegC的免疫表型,并比较REgC和MSCs对T细胞的免疫抑制作用,进一步探讨RegC对T细胞的免疫抑制机制,为寻找更好、更符合临床需要的免疫调节细胞用于防治GVHD提供实验依据.
方法：(1)骨髓MSCs的分离、培养及其生物学特性的研究:应用密度梯度离心分离法和贴壁筛选法进行体外人骨髓MSCs培养;倒置相差显微镜观察原代及传代细胞形态;流式检测法检测第3、5代人骨髓MSCs中CD29、CD34、CD45、CD105抗原的表达.
结果：骨髓MSCs的分离、培养及其生物学特性的研究:原代细胞24h开始贴壁，接种72h后，可见少量长梭形贴壁细胞，周围有明壳的圆形细胞存在，接种5d后，散在贴壁细胞增多，约至接种lOd时，细胞85％-90%融合，梭形突起变长，排列有明显方向性，细胞排列成漩祸状，胞浆淡染，核染色质粗。传代细胞刚接种时为圆形，较大，24h内完全贴壁，伸展成梭形，开始迅速增殖，3-4d达90%融合，成漩祸或平行状排列;流式检测法检测第3, 5代人骨滋MSCs免疫表型，结果显示:CD29, CD105高表达，阳性率达90%以上，CD34,CD45极低表达或不表达。
结论：(1)本研究证实Mscs与PaMCs体外短期(4a)共培养可诱导产生大量RegC，其主要为CD3+T细胞，达86%以上，其中CD4+T细胞达(46.24±0.98)%，CD8+T细胞达(38.18±1.02)%，而极少数为CD4+CD25+T细胞，占(3.83±0.29)%.(2)RegC和MSCs对PHA刺激下的T细胞增殖均具有抑制作用，且与细胞数量呈正相关，但RegC对T细胞的增殖抑制作用明显强于MSCs，小剂量RegC即可达到强烈的抑制作用。(3) RegC和MSCs对CD4+CD25+T细胞亚群均具有上调作用，且RegC对CD4+CD25+T细胞亚群的上调作用明显强于MSCs。(4)RegC促进Th2类因子IL-4，IL-10分泌，并抑制Th1类因子IL-2，IFN-y分泌，且Regc的作用明显强于MSCs，提示RegC可能成为治疗GVHD的有效细胞之一。