【摘 要】
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目的 观察线粒体氧化磷酸化解偶联剂----羰基-氰-对-三氟甲氧基本腙(Cyanide p-trifluoromethoxyphenyl-hydrazone,FCCP)对成熟脂肪细胞胰岛素敏感性及线粒体功能的影响.方法 以3T3-L1前体脂肪细胞为研究对象,经1-甲基-3-异丁基黄嘌呤(3-isobutyl-1-methyxanthine,MIX)、地塞米松、胰岛素方案诱导分化为成熟脂肪细胞,给予
【机 构】
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南京医科大学附属南京妇幼保健院 210008
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目的 观察线粒体氧化磷酸化解偶联剂----羰基-氰-对-三氟甲氧基本腙(Cyanide p-trifluoromethoxyphenyl-hydrazone,FCCP)对成熟脂肪细胞胰岛素敏感性及线粒体功能的影响.方法 以3T3-L1前体脂肪细胞为研究对象,经1-甲基-3-异丁基黄嘌呤(3-isobutyl-1-methyxanthine,MIX)、地塞米松、胰岛素方案诱导分化为成熟脂肪细胞,给予7.5μM FCCP干预分化成熟的3T3-L1脂肪细胞12h后,采用3H标记的2-脱氧葡萄糖检测成熟脂肪细胞的基础、胰岛素刺激下葡萄糖摄取率:采用Western Blot检测葡萄糖转运体4(GLUT4)的表达及转位,同时检测胰岛素信号转导通路中相关信号分子IRS-1、AKT的总蛋白水平及磷酸化水平:采用电子显微镜观察线粒体形态改变;荧光定量PCR技术检测线粒体DNA拷贝数;生物发光法检测细胞ATP含量;应用JC-1、DCFDA(2,7-Dichlorofluorescein diacetate,DCFDA)荧光染料预染成熟脂肪细胞,流式细胞仪观察线粒体膜电位及细胞活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)的变化.
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