羽衣甘蓝SRK13-b的克隆及激酶结构域的原核表达

来源 :第八届中国林业青年学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ufo747
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提取羽衣甘蓝(Brassica oleracea var.acephala)S13-bS13-b自交不亲和系花期柱头的RNA,利用RT-PCR的方法分离S13-b位点受体激酶基因(SRK16-b)。获得的羽衣甘蓝SRK13-B基因的长度为2571 bp,编码856个氨基酸,GeneBank收录号为Eu180597。将编码SRK13-b激酶结构域的序列插入到大肠杆菌表达载体pET14b中,构建原核表达质粒pET-SRK13-bCT,然后转化BL21(DE3)pLysS菌株中,经过0.1 mM IPTG诱导后,SDS-PAGE显示出约43 kDa蛋白质特异诱导表达,最后通过镍离子金属整合亲和层析的方法成功地将SRK13-b激酶结构域的融合蛋白纯化出来。
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