【摘 要】
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目的 通过研究建立噬菌体D29液体样本和气溶胶样本SYBR GreenⅠ实时QPCR检测方法.方法 实验室增殖获得一定滴度的噬菌体D29悬液,设计特异性的引物,使用QPCR仪对标准滴度
【机 构】
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军事医学科学院微生物流行病研究所,病原微生物生物安全国家重点实验室,北京100071
【出 处】
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中华预防医学会第三届学术年会暨中华预防医学会科学技术奖颁奖大会、世界公共卫生联盟第一届西太区公共卫生大会、全球华人公共卫
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目的 通过研究建立噬菌体D29液体样本和气溶胶样本SYBR GreenⅠ实时QPCR检测方法.方法 实验室增殖获得一定滴度的噬菌体D29悬液,设计特异性的引物,使用QPCR仪对标准滴度的样本进行检测,根据结果建立Ct值(Y)和对数浓度lgN (X)的直线方程,并对QPCR检测方法的灵敏度和特异性进行了研究.在气雾实验室中发生噬菌体D29气溶胶,使用AGI全玻璃撞击采样器进行采样,一份样本进行双层培养计数,另一份样本进行QPCR检测,比较两种检测方法得到的气溶胶浓度的差异. 结果 Ct值(Y)和对数浓度lgN (X)的直线方程为：Y=-3.08X+ 37.46,误差为0.026,相关系数为-0.996.液体样本检测的灵敏度为103pFU/ml,特异性高.气溶胶样本经过采样处理,QPCR法的检测结果是培养法结果的78.19±16.22倍.结论 四部法SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测方法对直接增殖的噬菌体D29样本检测速度快,结果与培养法相关性高.
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