【摘 要】
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通过PCR方法扩增完整的猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因,随后将其克隆到Bac—to—Bac杆状病毒表达系统pFastBacTM HT B载体中,获得重组转移载体pFast—ORF2,再将其转化至含有杆状病毒穿梭载体的DH10Bac感受态细胞中,发生转座反应,通过抗性蓝白斑筛选和PCR鉴定,获得重组穿梭质粒rBacmid—Cap,在脂质体介导下转染处于对数生长期的sf9昆虫细胞,获得重组杆状
【机 构】
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瑞普(保定)生物药业有限公司,河北 保定 071000 天津瑞普生物技术股份有限公司,天津 300
【出 处】
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第四届京津冀一体化畜牧兽医科技创新研讨会暨“瑞环杯”新思想、新方法、新观点论坛
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通过PCR方法扩增完整的猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因,随后将其克隆到Bac—to—Bac杆状病毒表达系统pFastBacTM HT B载体中,获得重组转移载体pFast—ORF2,再将其转化至含有杆状病毒穿梭载体的DH10Bac感受态细胞中,发生转座反应,通过抗性蓝白斑筛选和PCR鉴定,获得重组穿梭质粒rBacmid—Cap,在脂质体介导下转染处于对数生长期的sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒,PCR能够扩增出相应大小的片段,间接免疫荧光分析表明ORF2基因编码蛋白能在sf9细胞中获得表达,这为进一步研究PCV2亚单位疫苗奠定了基础.
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