IBDV H1株VP2基因的原核表达及复性

来源 :2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:heritage102
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应用反转录(RT-PCR)技术从河南传染性法式囊发病鸡中总RNA克隆出1461 bp的VP2基因,并将其克隆于pET-28a载体,筛选并构建了pVP2表达载体。经IPTG诱导后,在其宿主菌BL21(DE3)中成功表达了53.7 ku蛋白。经SDS-PAGE和Western blotting分析,VP2表达产物以包涵体形式存在,并与鸡IBDV抗血清及1株IBDV单抗发生特异性反应。利用溶菌酶、Triton-100、尿素等试剂进行纯化和复性后。对复性前后的蛋白分别与特异性多抗进行Dot-ELISA,复性后蛋白的反应活性增强了10倍,对复性后的蛋白与16株IBDV单抗进行Dot-ELISA,其中1H4、1E12、583、EA6、3C7与VP2反应强(+++);4E4和1H11与VP2反应中度(++);4E5、3C4、1E11、3H9反应较弱;EC6,3D12,1A1与VP2无反应。
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