【摘 要】
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本研究利用RNA干扰技术降低食管癌细胞ECA109中MDC1的表达,观察放射线照射后细胞周期和放射敏感性的变化,并探讨其相关机制.针对MDC1mRNA序列,设计合成3对有效的干扰序列(siR
【机 构】
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河北医科大学第四医院放疗科 050011
【出 处】
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第八届中国肿瘤学术大会暨第十三届海峡两岸肿瘤学术会议
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本研究利用RNA干扰技术降低食管癌细胞ECA109中MDC1的表达,观察放射线照射后细胞周期和放射敏感性的变化,并探讨其相关机制.针对MDC1mRNA序列,设计合成3对有效的干扰序列(siRNAl、siRNA2和siRNA3)和阴性对照序列,与载体PSIH1-H1-coPGFP连接形成重组质粒,瞬时转染细胞,real-time PCR和Western blotting检测MDC1的表达,筛选有效干扰序列,与慢病毒包装质粒混合物共同转染293T细胞,收集病毒液,感染ECA109细胞,获得稳定转染细胞系,命名为ECA109/M,转染空载体组命名为ECA109/N.real-time PCR和Western blotting测定MDC1在mRNA水平和蛋白水平的表达。采用MTT、克隆形成实验检测RNA干扰MDC1基因对ECA109细胞放射敏感性的影响;流式细胞术检测细胞周期的变化;Western blotting检测CHK1和CHK2蛋白表达的变化;激光共聚焦显微镜观测细胞核内斑点的数量变化。结果表明，RNA干扰降低MDC1蛋白表达后可以降低细胞周期相关蛋白的表达，解除细胞周期阻滞，从而增强食管癌细胞ECA109的放射敏感性。
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