玉米赤霉烯酮金纳米颗粒增强型酶联免疫分析方法的建立

来源 :中国食品科学技术学会第十七届年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sfol001
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  本研究建立了一种用于谷物中玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)检测的胶体金增强型间接竞争酶联免疫吸附分析方法(ELISA).首先通过柠檬酸三钠还原法制备胶体金,与HRP-羊抗鼠IgG 通过静电吸附进行物理偶联.将玉米赤霉烯酮包被原(ZEN-OVA)包被于96 孔酶标板中,37 ℃下孵育3 h.用PBST 缓冲液清洗3 次后,用0.5℅的脱脂乳粉37 ℃封闭1 h.清洗3 次后,加入不同浓度的待测物和抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体混合溶液,以PBS 作为空白对照,进行免疫结合反应.洗涤酶标板,向各孔中加入HRP-羊抗鼠IgG 或胶体金标记的HRP-羊抗鼠IgG,孵育0.5 h.洗涤后,加入TMB 底物溶液进行显色,15 min 后,加入1.25 mol/L H2 SO4 终止液终止.用酶标仪读取并记录吸光度(λ=450 nm).结果显示,对比传统的ELISA 方法,所建立的胶体金增强型ELISA 方法对ZEN 的检测灵敏度提高了7.77 倍,为谷物中的ZEN 提供更灵敏的分析.研究使用的胶体金具有较大的比表面积,可吸附大量的HRP-羊抗鼠IgG,并更有效地催化TMB 的显色,增强效果明显,为开发以纳米材料为载体的高灵敏度ELISA 方法,并应用于食品安全领域提供了技术指导.
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