菌丝霉素在枯草芽孢杆菌中的表达及生物活性的研究

• 作 者: 张丽聪;魏丹丹;单安山;
• 机 构: 东北农业大学动物营养研究所,哈尔滨150030
• 出 处: 中国畜牧兽医学会动物营养分会第七届中国猪营养学术研讨会
• 发表日期: 2015年期

本试验利用枯草芽孢杆菌表达系统高效重组表达具有活性的抗菌肽菌素霉素(Plectasin),设计了融合目的基因SPsacB-6× His-SUMO-Plectasin,将穿梭表达载体pGJ 148及融合目的基因经EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切作用后,进行连接以构建重组表达载体,将重组载体转化至宿主菌枯草芽孢杆菌WB800N中,主要研究结果如下:1)本研究人工设计融合目的基因SPsacB-6× His-SUMO-Plectasin,将基因序列进行全基因合成,双酶切结果发现目的片段大小与预期一致;2)成功构建重组表达载体PGJ 148/SPsacB-6×His-SUMO-Plectasin,并利用化学转化方法转入枯草芽孢杆菌WB800N中,通过麦芽糖诱导,使融合基因成功表达.此后,对诱导条件进行优化,结果显示在麦芽糖浓度为7％时诱导量最高,考马斯亮蓝法测定其表达量,可获得融合蛋白SUMO-Plectasin约41 mg/L;3)利用Ni-NTA柱对融合蛋白SUMO-Plectasin进行亲和纯化.通过SUMO酶切割融合蛋白并释放重组Plectasin,并通过组氨酸亲和层析对重组Plectasin进行纯化.利用考马斯亮蓝法对表达量进行测定,可获得重组Plectasin约5.5 mg/L;4)采用最小抑菌浓度(MIC)法对表达产物进行抑菌活性检测,结果发现重组Plectasin对金黄色葡萄球菌为1μg/mL,肺炎链球菌为2μg/mL,表皮葡萄球菌为8 μg/mL.溶血活性试验结果显示重组蛋白在最大浓度时无溶血活性.因此，本试验目的在于，利用枯草芽抱杆菌表达系统高效重组表达具有活性的抗菌Plectasin，并对重组Plectasin进行体外活性的研究，为今后开发全新高效抗菌肽类饲料添加剂提供理论基础与实验依据，对减少或替代抗生素的使用具有重要意义。