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因多种疾病引起的骨缺损在临床当中十分常见,但治疗困难.近年来组织工程学的创立和迅速发展,为骨组织修复提供了新的思路和方法.骨组织工程研究主要有三个方面:种子细胞,生长因子,支架材料.其中,骨髓间充质干细胞(MSCs)及其诱导因子是目前生命科学研究的重点.众多学者多采用化学药物(如地塞米松,维生素C,β-甘油磷酸钠等)或生长因子(如骨形态发生蛋白2)将骨髓间充质干细胞(MSCs)诱导为成骨细胞,用于修复骨缺损.但上述骨诱导因子仍存在着诱导转化率不稳定、使用安全性等诸多问题.结合中药生肌膏能够治疗感染开放性骨折的临床经验,本试验尝试将生肌液作为MSCs的刺激因子进行研究.
目的:考察中药生肌液对体外培养的兔骨髓间充质干细胞(MSCs)成骨活性的影响及其作用特点,为骨组织工程研究找寻一种新的作用因素,探索中药在骨组织工程领域的新应用.
方法:1取家兔胫骨骨髓,用密度梯度离心-贴壁筛选的方法,获取并培养鉴定MSCs.2以不含生肌液的基础培养液(含10％胎牛血清的MEM培养基)为空白对照,以含地塞米松10-8 M,维生素C0.05 /1,β-甘油磷酸钠10mM的基础培养液为标准对照.在基础培养液中加入生肌液,分别制成1:20(生肌液浓度为0.15g/m1)、1:60(生肌液浓度为0.05g/m1)、1:100(生肌液浓度为0.03g/m1)的条件培养液.将不同浓度的生肌液作用于兔MSCs,采用空白对照、标准对照,用镜下观察、四环素标记、胶原Ⅰ免疫组织化学染色和检测细胞成骨标志物碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)、乳酸脱氢酶(LDH)的方法,计算出其比值(ALP/LDH和OCN/LDH),考察MSCs的成骨活性.
结果:在条件培养后的2周、3周时间点:生肌液组MSCs细胞四环素标记呈阳性(可见钙结节荧光),胶原Ⅰ免疫组织化学染色亦呈阳性,空白对照组为阴性;成骨标志物ALP和0CN在生肌液组均有表达,且ALP/LDH和0CN/LDH比值都是以1:20生肌液组最高(P＜0.05).
结论:生肌液对MSCs的诱导成骨作用肯定,且与剂量有关,高浓度生肌液的诱导成骨活性最强.