【摘 要】
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胸腺苷酸合成酶(Thymidylatesynthase,简称TS)催化dUMP生成dTMP和二氢叶酸,dTMP再进一步转化为dTTP,后者是DNA合成的重要前体,多年来TS一直作为癌症化疗的一个重要靶点,斑马鱼作为一种重要的模式生物,已成功用于多种药物筛选模型的构建,但斑马鱼TS的基因序列与功能尚未见报道.本研究采用RT-PCR和RACE方法,从斑马鱼胚胎中克隆出TS的cDNA全长序列,分析表明它
【机 构】
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中国科学院海洋研究所,青岛,266071;中国科学院研究生院,北京,100039 中国科学院海洋研
【出 处】
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国家“863”计划资源环境技术领域第三届海洋生物高技术论坛
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胸腺苷酸合成酶(Thymidylatesynthase,简称TS)催化dUMP生成dTMP和二氢叶酸,dTMP再进一步转化为dTTP,后者是DNA合成的重要前体,多年来TS一直作为癌症化疗的一个重要靶点,斑马鱼作为一种重要的模式生物,已成功用于多种药物筛选模型的构建,但斑马鱼TS的基因序列与功能尚未见报道.本研究采用RT-PCR和RACE方法,从斑马鱼胚胎中克隆出TS的cDNA全长序列,分析表明它的编码序列含有954个核苷酸,编码一个318个氨基酸的蛋白序列,分子量为36kD.为了研究斑马鱼TS蛋白的性质,将该cDNA序列与表达载体pET-28连接,构建表达载体pET-28/Z-TS,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,纯化后获得了高纯度的均一性TS蛋白.酶学分析表明斑马鱼TS蛋白在28℃表现出比较高的生物活性,Km值与人等生物的TS蛋白比较接近.
其他文献
针对酶制剂在饲料行业上的应用特点,作者通过大量试验,筛选出几种有效的稳定化材料和方法:对糖化酶用硬脂酸盐处理,残活提高40-43﹪;用不同载体吸附,残活提高1.5-1.7倍;采用吸附和包被复合保护处理,残活提高2倍以上.经过制粒生产试验,80℃条件下制粒,对照残活率为27.54﹪,处理后的残活率为81.37﹪,达到饲用化技术经济目标.
为了获得中性或碱性条件下瑞氏木霉纤维素酶酶活提高的突变株,本文采用易错PCR技术和改错突变株技术建立了突变体文库.测序结果在321位的氨基酸由Asn转变为Thr.
本文以木聚糖酶应用于饲料工业为目的,进行了木聚糖酶产酶菌株的诱变选育,固态发酵条件及其酶的相关性质的研究等.
本文作者针对青霉素G酰化酶的表达量和构建枯草芽孢杆菌通用表达质粒进行了研究.结合SignaIp对信号肽序列的分析结果改造BmpGA的信号肽.
本研究利用RT-PCR RACE等方法克隆到担子菌漆酶cDNA.利用pGAPA和pGAP2aA表达载体与漆酶cDNA构建重组表达子,利用漆酶氧化ABTS发生颜色变化的特性筛选漆酶产生菌.
本文利用酵母细胞表层展示体系功能表达抗体酶6D9,为进一步抗体酶库构建和抗体酶进化筛选提供有利的工具.为提高催化产率提供基础.
本实验用重组pichia pastoris在50mL,正进行10L自动发酵罐从PH,溶氧培养基的组成等方面进行优化和放大初步具有腺苷甲硫氨酸(SAM)工业化的可能.
本研究尝试用甲醇酵母表达D-氨基酸氧化酶,构建了高表达量D-氨基酸氧化酶的重组Pichia postoris菌进行了摇瓶发酵条件的研究.
应用PCR技术从副溶血弧菌wVp2株扩增了tdh基因,将tdh基因经BamHI、EcoRI双酶切后定向插入pGEX-4T-1表达载体,测序分析结果表明所克隆的tdh基因与tdh1基因(GenebankM10069)的同源率达99.82﹪,开放阅读框(ORF)为570nt,编码由189个氨基酸组成、分子量为23kDa的耐热直接溶血素.转化pGEX-4T-1-tdh的大肠杆菌BL21(DE)经IPTG
本文采用细胞松弛素B处理,抑制栉孔扇贝受精卵的第一极体,研究了抑制PB1对受精卵减数分裂过程及胚胎倍性组成的影响。结果表明,抑制第一极体显著改变了受精卵的染色体行为,在第二次减数分裂过程中共发现4种典型染色体分离类型,分别是三极分离(41.7﹪)、二极分离(11.7﹪)、双二极分离(24.9﹪)和非同步分离(2.8﹪),其余的受精卵(19.0﹪)染色体分离行为紊乱。4-8细胞期胚胎的倍性组成分析表