【摘 要】
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目的：多西紫杉醇是目前乳腺癌临床治疗的一线药物.由于耐药问题不可避免地发生,患者常常对化疗不敏感,进而导致乳腺癌复发转移.近期研究表明微泡能作为一种新通讯媒介在不同亚群的肿瘤细胞之间交换遗传物质,参与耐药性传递而促进肿瘤发展恶化,并且可能与包裹的生物活性物质如microRNAs(miRNAs)有关.本实验旨在探讨耐药乳腺癌细胞来源的微泡是否携带选择性的miRNAs,能否传递miRNAs改变敏感细胞
【机 构】
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南京医科大学第四临床医学院,南京,210029;南京医科大学附属肿瘤医院,江苏省肿瘤医院普外科,南京,210009
【出 处】
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2014华东胸部肿瘤论坛暨第七届浙江省胸部肿瘤论坛
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目的：多西紫杉醇是目前乳腺癌临床治疗的一线药物.由于耐药问题不可避免地发生,患者常常对化疗不敏感,进而导致乳腺癌复发转移.近期研究表明微泡能作为一种新通讯媒介在不同亚群的肿瘤细胞之间交换遗传物质,参与耐药性传递而促进肿瘤发展恶化,并且可能与包裹的生物活性物质如microRNAs(miRNAs)有关.本实验旨在探讨耐药乳腺癌细胞来源的微泡是否携带选择性的miRNAs,能否传递miRNAs改变敏感细胞的化疗耐受性.
方法：通过超速离心法从乳腺癌细胞敏感株(MCF-7/S)和多西紫杉醇耐药株(MCF-7/Doc)的培养上清中分离微泡(S/exo和D/exo),并由透射电镜鉴定形态.提取细胞和对应微泡的总RNA后,行微阵列和聚合酶链式反应检测miRNAs表达谱.利用重组慢病毒载体构建稳定表达绿色荧光蛋白的敏感株(GFP-MCF-7/S),与PKH26红色染料标记的微泡共育后,流式细胞仪和共聚焦显微镜观察摄取速度,同时比较不同微泡处理后引起的受体细胞内miRNAs改变.靶基因预测和通路富集工具评估两种微泡内miRNAs的生物学功能.微泡共育实验和miRNA模拟物转染实验分析D/exo对GFP-MCF-7/S耐药性和胞内基因的影响.
结果：与S/exo类似,D/exo也是圆形或椭圆形的膜性囊泡,大小在30～100nm之间.层次聚类和相似性分析提示两种微泡与其来源的细胞有共同表达的miRNAs;一些miRNAs在微泡内积累而无法在细胞中检测到,部分miRNAs保留在细胞内而不分泌至微泡中.共聚焦显微镜观察发现PKH26红染的微泡不仅黏附至GFP-MCF-7/S表面,还能被后者吞没和内在化;流式细胞检测呈现动态的吸收过程.此外,随着微泡的不断摄取,miRNAs表达在GFP-MCF-7/S中逐渐上调;微泡内高水平的miRNAs传递效率较高,相对低含量的miRNAs在受体细胞内则积累较慢.靶基因预测和通路分析显示D/exo内最高表达的20个miRNAs参与了肿瘤发病、细胞周期调控、MAPK和TGF-1β信号通路等与耐药相关的生物学进程.微泡共育实验证实D/exo较S/exo能够显著降低多西紫杉醇诱导的GFP-MCF-7/S凋亡并同时增加存活率.最后,miRNA模拟物转染实验表明富含miR-222和miR-23a的D/exo可以调节GFP-MCF-7/S内的基因表达.
结论：耐药乳腺癌细胞能够通过释放微泡传递耐药性至敏感细胞,并且该效应可能与细胞间横向传递的特异性miRNAs有关.
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