【摘 要】
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目的:探讨溶酶体组织蛋白酶L(Cathepsin L)是否通过上皮-间充质转化(EMT)影响乳腺癌细胞的侵袭及迁移能力. 方法:利用荧光定量PCR来检测人乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231、M
【机 构】
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南方医科大学附属南方医院肿瘤科 广州 510515
【出 处】
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第五届国际中医、中西医结合肿瘤学术交流大会暨第十四届全国中西医结合肿瘤学术大会
论文部分内容阅读
目的:探讨溶酶体组织蛋白酶L(Cathepsin L)是否通过上皮-间充质转化(EMT)影响乳腺癌细胞的侵袭及迁移能力.
方法:利用荧光定量PCR来检测人乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-468以及SKBR-3中Cathepsin L的表达水平;设计并合成靶向CathepsinL的特异性shRNA,通过脂质体转染法转染Cathepsin L表达最高的乳腺癌细胞MCF-7以构建稳定低表达Cathepsin L细胞株,通过western blot 和定量PCR 来验证shRNA 的干扰效率;通过划痕实验及transwell法检测干扰后细胞的迁移及侵袭能力,western blot法检测EMT相关指标E-cadherin和N-cadherin以及其上游信号分子Snail、WNT-5a的变化.
结果:Cathepsin L-shRNA转染后,能够有效抑制MCF-7 细胞中Cathepsin L的表达;划痕实验结果显示,Cathepsin L 干扰组细胞迁移能力显著低于阴性对照组(P＜0.001);Transwell法结果显示,Cathepsin L干扰组细胞侵袭能力显著低于阴性对照组(P＜0.001).Westernblot法结果发现,Cathepsin L干扰组细胞的E-cadherin 表达增加,N-cadherin 的表达降低;此外,Cathepsin L干扰组细胞的Snail、WNT-5a 表达较对照组显著下降.
结论:运用RNA干扰技术能够有效沉默MCF-7细胞的Cathepsin L基因,并诱导其迁移侵袭能力的下降,其可能的机制是通过调节EMT的上游信号分子Snail、WNT-5a的表达来调控EMT,从而影响乳腺癌细胞的迁移及侵袭.提示Cathepsin L在乳腺癌的发生发展中起重要作用,抑制Cathepsin L的表达可能成为一种治疗乳腺癌的新方法.
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