【摘 要】
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本研究根据NCCRP-1基因序列保守区域设计简并性引物,应用RT-PCR和RACE技术克隆了草鱼NCCRP-1基因全长,并进行序列的生物信息学分析.结果表明,NCCRP-1基因全长900bp,其中5
【机 构】
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广东海洋大学水产学院,广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室,广东湛江524025
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本研究根据NCCRP-1基因序列保守区域设计简并性引物,应用RT-PCR和RACE技术克隆了草鱼NCCRP-1基因全长,并进行序列的生物信息学分析.结果表明,NCCRP-1基因全长900bp,其中5′非编码区和3′非编码区分别为3bp和183bp；714bp的编码区共编码237个氨基酸残基.根据推测的氨基酸序列计算,NCCRP-1的分子量为27.335Kda,理论等电点为5.63.BLAST分析显示草鱼的NCCRP-1与鲤鱼等鲈形目鱼种的同源性较高.将草鱼NCCRP-1的成熟多肽连接到原核表达载体pET-32a上进行原核表达,结果显示重组融合蛋白在分子量约29kDa处有一明显表达带；以鼠抗His-tag单抗为一抗,辣根过氧化物酶标记的山羊抗鼠IgG为二抗进行Western blot分析,结果表明显色带分子量大小相符,为进一步研究其功能特性奠定基础.
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