【摘 要】
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目的：通过对real-time PCR反应条件的优化，建立重复性好，特异性、敏感性高的标准品和标准曲线。方法：将重组鸡逗病毒rFPV-F-VP0，分别接种CEF细胞传代20代次，提取1、5、 10、15、20代次重组鸡逗病毒的基因组，同时优化荧光定量PCR反应条件，根据病毒FHN和FVP0核酸序列，设计合成特异性引物，构建制备标准DNA模板。结果：各代次外源基因的拷贝数均不相同，对照FPV没有检测
【机 构】
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军事医学科学院军事兽医研究所,吉林长春 130122
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目的：通过对real-time PCR反应条件的优化，建立重复性好，特异性、敏感性高的标准品和标准曲线。方法：将重组鸡逗病毒rFPV-F-VP0，分别接种CEF细胞传代20代次，提取1、5、 10、15、20代次重组鸡逗病毒的基因组，同时优化荧光定量PCR反应条件，根据病毒FHN和FVP0核酸序列，设计合成特异性引物，构建制备标准DNA模板。结果：各代次外源基因的拷贝数均不相同，对照FPV没有检测到外源基因拷贝数，检测引物TKsF/TKsR在各代次重组毒中没有检测到TK基因的表达，证明通过5-溴脱氧核糖尿苷(BrdU)加压筛选的鸡逗病毒构建正确。结论：为阐明重组鸡痘病毒的免疫机理和进一步的临床应用研究提供了理论基础。
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猪繁殖与呼吸道综合征是影响世界养猪业的重要传染病之一。CD163受体是PRRSV侵入宿主细胞的一个重要的细胞受体。本研究以Marc-145细胞的CD163基因为研究对象，在CD163作用域的初步筛选的基础上，制备其多克隆抗体，为进一步验证该受体的作用域奠定基础。研究结果显示，在重悬缓冲液中加入的β-巯基乙醇、尿素、Tween 20、甘油和SDS这五种化合物，可能在超声裂解过程中存在协同作用，共同作
通过对Genbank发布的PPV、PRV和PCV2的核苷酸序列进行比对分析，利用Primer PTemier 5.0软件设计出高溶解温度引物，经过PCR反应条件优化，将传统三温式PCR过程中的退火与延伸并为一步，建立多重二温式PCR方法，对三个阳性克隆质粒的敏感性均达到200拷贝，经临床初步验证可靠性高、稳定性好，有利于三种疫病的实验室快速诊断，也可用此法进行流行病学调查，在保证准确性的基础上大大
本研究用IFA方法检测ALV-A和ALV-J，同时，通过PCR方法扩增ALV-A和ALV-J env基因片段，目的是评估地方品种HR土鸡中不同亚型ALV的共感染状态。本研究发现，HR土鸡群中普遍存在ALV感染，IFA与PCR方法己分别证实了在同一只鸡体内存在ALV-A与ALV-J两种亚型ALV的共感染，而不同亚型ALV共感染的致病性有可能更强，造成的危害将更加严重。
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