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目的:探究甘氨酰tRNA合成酶(glycyl tRNA synthetase,GlyRS)通过转录延长因子4(elongation factor 4,ELP4)ELP4调控乳蛋白合成的作用机制.
方法:选用组织块培养法,体外培养并得到了纯化的奶牛乳腺上皮细胞,用蛋白质免疫印记(WB)和免疫荧光(IF)检测细胞中CK18和CSN2的表达以鉴定细胞的纯度和泌乳功能;用免疫共沉淀(Co-IP)技术沉淀并鉴定了细胞中ELP4与G1yRS的相互作用。
结果:ELP4过表达后CSN2表达显著上升;对G1yRS进行过表达和干扰,结果显示,GlyRS过表达后,ELP4的表达显著增加,CSN2的表达显著增加;G1yRS干扰后,ELP4的表达显著下降,CSN2的表达显著下降;GlyRS过表达后,细胞中p-NFκB1与ELP4的启动子序列结合显著增,GlyRS干扰后,细胞中p-NFκB1与ELP4的启动子序列结合显著降低。
结论:GlyRS应答氨基酸信号,通过调节ELP4调控乳蛋白合成的转录起始。