【摘 要】
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目的 构建Plectasin高效原核表达菌株并优化重组菌株表达条件.方法 将Plectasin基因与四种分子伴侣融合分别构建四种重组菌株并诱导表达融合蛋白,使用Bradford法和Quanti
【机 构】
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南方医科大学珠江医院呼吸科 510280
【出 处】
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广东省医学会第十八次呼吸病学学术会议暨2015岭南呼吸论坛
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目的 构建Plectasin高效原核表达菌株并优化重组菌株表达条件.方法 将Plectasin基因与四种分子伴侣融合分别构建四种重组菌株并诱导表达融合蛋白,使用Bradford法和QuantityOne软件对融合蛋白进行定量并计算Plectasin理论产量,最后切割释放Plectasin；使用纸片扩散法检测融合表达Plectasin抗菌活性；设计诱导剂浓度、诱导温度和诱导时间三因素三水平正交试验优化重组菌株表达条件.结果 四种重组大肠杆菌菌株成功构建,四种融合蛋白量分别为0.1732 g/L、0.1359g/L、0.1745g/L、0.1708g/L,Plectasin理论产量分别为0.0356 g/L、0.0358 g/L、0.0238g/L、0.0243g/L；Plectasin对MRSA、PRSP、VRE均有抗菌活性；重组菌株优化表达条件为30℃、6h和0.05mmol/L IPTG.结论 本研究成功构建Plectasin高效表达重组菌株,确立了重组菌株表达Plectasin优化条件,为Plectasin产业化奠定了基础及未来进入临床应用展现良好前景.
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